Sporicidale registreringskrav

Sporicider bruges på hårde, ikke-porøse livløse overflader og genstande til at dræbe sporer. Bakteriesporer anses for at være den sværeste form for mikrobielt liv at ødelægge.

U.S. EPA kræver generering af effektivitetsdata under kontrollerede testbetingelser for at kunne fremsætte sporicidale påstande om antimikrobielle produkter. For at generere sporicide effektivitetsdata skal AOAC's officielle metode 966.04 Sporicid Aktivitet af Desinfektionsmidler følges. Tilføjelse af en påstand for en hård, ikke-porøs sporicidal overflade til et flydende produkt indebærer at udsætte 60 bærere af penicylinder af rustfrit stål inokuleret med sporer af Bacillus subtilis (ATCC 19659) og Clostridium sporogenes (ATCC 3584) for sporicidet. Tre batches af produktet på LCL for A.I.(erne), der er opført på CSF'en for produktet, bør testes. Ud over dette krav skal et sporicid også demonstrere fravær af vækst ((fuldstændig udrydning) på 60 bærere (30 bærere pr. organisme for ét batch) i en verifikationstest. Verifikationstests skal udføres i et separat laboratorium eller med et nyt personale.

I Europa udfører producenter suspensionstests i overensstemmelse med metode EN13704 for at hævde sporicidal aktivitet. For at fremsætte en sporicidal påstand skal en >3 logreduktion af Bacillus subtilis (ATCC 6633) opnås med en kontakttid på mindre eller lig med 60 minutter.

Den mest opdaterede version af EN13704 i 2018 blev udgivet med en række ændringer fra den tidligere version udgivet i 2002, herunder ændringer i sporeforberedelse og modtagelighedstjek af testorganismer. 

EN13704 sporeforberedelse kræver, at 80 % af de vegetative celler sporulerer, og AOAC 966.04 kræver, at 95 % af de vegetative celler sporulerer.  Når først sporesuspensionen er lavet, kræver EN13704 en følsomhedstest for at kontrollere sporesuspensionens ydeevne mod to standardbiocider, glutaraldehyd og pereddikesyre. Testene bruger to styrker pr. biocid, høje og lave koncentrationer. For at opfylde EN13704's acceptkriterier skal sporesuspensionen demonstrere overlevelse (<3 log-reduktion) ved den lave koncentration og udrydning (>3 log-reduktion) ved høj koncentration. AOAC 966.04 kræver en saltsyreresistenstest for at kontrollere sporesuspensionens ydeevne mod en 2.5 M HCl-standard. For at opfylde AOAC 966.04 acceptkriterier skal sporerne modstå 2.5 M HCl for mere end eller lig med 2 minutter.

Brugen af sporesuspensioner i AOAC sporicidtest, og den omhyggelige forberedelse og brug af sporesuspensioner i EN13704 sikrer, at produkter, der hævder at være sporicidale, udfordres på passende måde under effektivitetstestning.

Kvaternær ammoniumforbindelse sporicidal virkning

Kvaternære ammoniumforbindelser (QAC'er) er kationiske overfladeaktive midler og har en bred vifte af aktivitet mod mikroorganismer, selvom de generelt er mere effektive mod grampositive bakterier i lavere koncentrationer end gramnegative bakterier. De er betydeligt mindre effektive mod sporedannende³. 

Mange biocider er bakteriedræbende eller bakteriostatiske i lave koncentrationer for ikke-sporulerende bakterier, herunder de vegetative celler af Bacillus- og Clostridium-arter. Høje koncentrationer af nogle biocider kan opnå sporicidal effekt (f.eks. for glutaraldehyd og CRA'er). 

Derimod mangler selv høje koncentrationer af alkohol, phenoler, QAC'er og klorhexidin en sporicidal effekt (selv om sporicidal effekt kan være mulig for klorhexidin, når det bruges ved forhøjede temperaturer)⁴. 

QAC'er er sporostatiske; de hæmmer udvoksning af sporer (udviklingen af en vegetativ celle fra en spiret spore), men ikke de faktiske spiringsprocesser (udvikling fra dvale til en metabolisk aktiv tilstand)².

QAC'er vil sandsynligvis vise en vis grad af effektivitet mod vegetative celler af Bacillus- og Clostridium-arter, men QAC'er er ikke i stand til at ødelægge selve sporen.

QAC'er vil sandsynligvis vise en vis grad af effektivitet mod vegetative celler af Bacillus- og Clostridium-arter, men QAC'er er ikke i stand til at ødelægge selve sporen. For at bevare kontrollen i renrumsmiljøet bør der anvendes biocidholdige midler med sporicidal aktivitet mod selve sporerne.

[1] McDonnell, G, Russell AD. Antiseptic and Disinfectant: Activity, Action and Resistance. Clin Micrbiol. 1999. jan; 12(1):147-179.
[2] Russell AD. Bacterial spores and chemical sporicidal agents. Clin Microbiol Rev. 1990 apr; 3(2):99-119.
[3] Sandle, T. The CDC Handbook: A Guide to Cleaning & Disinfecting Cleanrooms. 1–27.
[4] Shaker L A, Russell A D, Furr J R. Aspects of the action of chlorhexidine on bacterial spores. Int J Pharm. 1986;34:51-56.